В продолжение темы о сакраментальных 400 ккал и 400 г. В название поста включено начало названия статьи 2004 года.
Circulating Ghrelin Is Sensitive to Changes in Body Weight during a Diet and Exercise Program in Normal-Weight Young WomenH. J. Leidy J. K. Gardner B. R. Frye M. L. Snook M. K. Schuchert E. L. Richard N. I. Williams
The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, Volume 89, Issue 6, 1 June 2004, Pages 2659–2664,
https://doi.org/10.1210/jc.2003-031471Published: 01 June 200
https://academic.oup.com/jcem/article-lookup/doi/10.1210/jc.2003-031471Исследователи задались целью:
1) оценить долговременные изменения в уровне гормона грелина (совместно с прочими метаболическими параметрами и составом тела) в ответ на диету и физические упражнения, ведущие к похудению женщин с нормальным весом;
2) определить, ведут ли физические упражнения к изменению уровня грелина при отсутствии дефицита калорий, т.е. у женщин, удерживающих в ходе эксперимента текущий вес.
К участию в эксперименте были привлечены здоровые молодые женщины в возрасте 18-30 лет, без пищевых расстройств, с весом 48-73 кг, при содержании жира в организме 15-30%, индексом массы тела в пределах 18-25, некурящие, не принимающие влияющие на уровень основного обмена (УОО) медикаменты, вес которых в течение последнего года был стабилен ±2,3 кг, не занимавшиеся аэробными физическими упражнениями, либо занимавшиеся не свыше одного часа в неделю, не принимавшие в последние полгода гормональные контрацептивы, при длительности двух последних менструальных циклов в пределах 25-35 дней, способные к участию в эксперименте с контролируемым питанием и к выполнению аэробных физических упражнений.
О целях эксперимента участницы были осведомлены (что не является общим местом и обязательным условием, в эксперименте по определению сытности продуктов
http://www.minusfunt.ru/BB/viewtopic.php?f=24&t=140истинные цели были от участников скрыты, их сознательно ввели в заблуждение). Первоначальное число участниц составляло 38 человек, к концу исследования их осталось 22.
Каждая из участниц обследовалась в течение базового периода длительностью в один менструальный цикл, за которым следовал период собственно эксперимента с контролируемой диетой и выполнением физических упражнений (или отсутствием таковых) длительностью 3 менструальных цикла. До начала эксперимента участников разделили на 4 группы, каждой группе была предписана определенная диета и определенный режим выполнения (или отсутствия) физических упражнений. Группы были образованы следующие:
1) Контрольная группа – физические упражнения отсутствуют, диета без дефицита калорий с целью удержания веса.
2) Группа с высоким уровнем физической нагрузки, повышенным потреблением калорий с целью компенсации физической нагрузки и удержанием веса.
3) Группа с планируемым малым снижением веса и выполнением физических упражнений, с малым дефицитом калорий.
4) Группа с бóльшим, чем в группе 3, планируемым снижением веса и выполнением физических упражнений, с бóльшим, чем в группе 3, дефицитом калорий.
В ходе эксперимента ежедневно подсчитывалась энергетическая ценность потребленной каждым участником пищи, а по завершению физического упражнения подсчитывались энерготраты в ккал.
Каков был расчетный дисбаланс, организаторы не указывают, да он и не мог быть соблюден по известным причинам. В среднем дисбаланс не мог быть высоким, поскольку вес участниц группы «похудевших» уменьшился на 3,2±0,8 кг (из них 2,6±0,7 жир, и 0,6±0,7 кг – безжировая масса тела БМТ). В указанных значениях (±) – это стандартное отклонение значения, по факту отвес в группе похудевших составлял от минимального 1,22 кг до максимального 4,34 кг, т.е. на 400 г в неделю не худела ни одна из участниц, максимальный средний недельный отвес составил 4,34/12 = 0,362 (кг) = 362 г. То, что похудение не было экстремальным, следует также из сравнения потерь жира и БМТ, с соотношением примерно 4:1, что заведомо лучше обычно наблюдающегося соотношения 3:1 или 2:1. Благоприятное соотношение обеспечивается также наличием физических упражнений.
То, что участницы не худели за пределами зоны дисбаланса 400 ккал, следует из измерения УОО, равного (в среднем) в группе похудевших 32,6 ккал до похудения и снизившегося всего до 32,1 ккал на 1 кг БМТ.
Исходя из идеальных соображений, следовало ожидать всего трех числовых значений конечного отвеса – нулевые отвесы в группах 1 и 2, среднее значение отвеса в группе 3, и большой отвес в группе 4, в полном соответствии с планом эксперимента. Как можно было ожидать, в условиях «вольной жизни», с полным доверием организаторов к участницам по вопросам соблюдения режима, что-то пошло не так, сказались нарушения и статистические разбросы.
Относительно соблюдения режима. Мы выше высказывали мнение, что все эксперименты по исследованию метаболизма должны выполняться в условиях казарменного содержания участников (как следует из отчетов Миннесотского исследования, даже в тех условиях, целью которых являлась имитация содержания узников концлагерей, отдельные участники находили возможность добывать еду помимо предусмотренной условиями). Из 38 участниц «дожили» до конца эксперимента всего 22.
Причины выбытия 16 участниц в статье не приводятся, заведомо такие потери не могут быть объяснены прекращением учебы, сменой места жительства или заболеванием, учитывая жесткий входной контроль при отборе кандидатов. Чтобы понять цифру отсева и причину изменения организаторами первоначального плана, рассмотрим методику питания участниц и приведем некоторые соображения, учтенные в системе МФ, но игнорируемые в планах питания подобным рассматриваемому.
Пища для участниц готовилась на «метаболической кухне» исследовательского центра все 3 месяца исследования, и участницам было предписано питаться не менее чем 2 раза в течение дня в центре. Питание было трехразовым, дальнейшие подробности в статье не описываются, но с учетом пояснения, что потреблялась только пища, приготовленная в центре, участницы, скорей всего, отпускались после обеда домой с пакетом еды.
Калорийность пищи тщательно подсчитывалась, по макронутриентному составу включала в себя 15% белков, 30% жиров и 55% углеводов. Всего было разработано 8 вариантов меню с циклической ротацией вариантов. Уровень потребления калорий для каждой участницы определялся следующим образом:
1) измерялся УОО каждой участницы;
2) определялась индивидуальная суточная физическая активность участницы, для чего на бедре участницы на 7 дней закреплялся трехосевой акселерометр RT3.
Затем, во время базового периода, участницы питались 7 дней при калорийности, полученной путем суммирования значений по п. 1 и 2, т.е. УОО и повседневной физической активности, и это значение незначительно корректировалось, если вес в течение 7 дней не оставался стабильным. В дальнейшем, на этапе собственно исследования, калорийность питания увеличивалась или уменьшалась в сравнении с определенной вышеописанным образом калорийностью удержания, в зависимости от принадлежности участницы к определенной группе.
Участницам предписывалось съедать всю предложенную им еду, и только ее. Все несъеденные остатки еды еще раз взвешивались, и их калорийность учитывалась и в дальнейшем вычиталась из предложенной суммарной калорийности пищи. Организаторам удалось удерживать недельную энергетическую ценность рациона с точностью до 35 ккал. Участницам категорически не рекомендовалось принимать пищу, не предусмотренную исследованием, но если подобное происходило, калорийность сторонней пищи и ее макронутриентный состав учитывались. В ходе всего исследования тщательно учитывалось среднее значение суточного и недельного потребления калорий. По ходу исследования измерялся вес тела и суточные энерготраты, с последующей незначительной коррекцией рациона и расхода калорий на физические упражнения.
Группа участниц со стабильным весом потребляла 2040±89 ккал в начале эксперимента с незначительным снижением на 40 ккал к концу. Группа похудевших потребляла 2010±173 ккал в начале эксперимента со снижением на 120 ккал к концу. Удивительно то, что по калорийности потребляемой пищи совершенно не просматривается средний дисбаланс порядка 250-300 ккал, который наверняка между группами был по самому факту похудения. Уровень физактивности в тренажерном зале также одинаков. Критерии распределения участниц по первоначальным группам не приводятся (вообще-то распределение должно быть случайным или равномерным), но, сознательно или случайно, УОО в группе стабильного веса меньше, чем в группе похудевших (0,83 и 0,95 ккал/мин соответственно), что может объяснить разницу в энерготратах за счет УОО в 170-175 ккал. Также в статье не приводится уровень повседневной активности участниц, который может быть выше в группе похудевших за счет их большего начального веса (в среднем по группам 56,6 и 60,4 кг, что еще один признак того, что распределение участниц по группам не было случайным – в группу похудевших попадали те, кто выражал желание похудеть, а не удерживать вес).
В трех первоначальных группах (2, 3 и 4) участницы выполняли аэробные упражнения 5 раз в неделю с частотой пульса 70-80% от максимальной частоты сердечных сокращений, определенной по тестам аэробной производительности (максимальное потребление кислорода МПК, VO2 max) . Длительность упражнений в минутах определялась исходя из предписанного уровня энерготрат в калориях (по окончательным группам в группе похудевших расход калорий за тренировочную сессию составлял 486±90 ккал в группе стабильного веса и 480±126 ккал в группе похудевших). Упражнения выполнялись под присмотром персональных тренеров в тренажерном зале. Общее количество выработанных во время упражнения калорий определялось по функции OwnCal пульсометра Polar S610. Более тщательно расход калорий подсчитывался к концу каждой недели для соответствия предписанному расходу. По ходу исследования пульсометр непрерывно подстраивался под текущие изменяющиеся значения веса, максимальной частоты пульса, МПК и возраста.
Перед началом исследовательского периода, в его середине и по его завершению, посредством гидростатического взвешивания, с последующим вычислением плотности тела, определялись процент жира в организме, жировая масса и БМТ. Вес тела определялся взвешиванием с точностью до 0,01 кг в те же дни, когда определялся состав тела, а также дважды в неделю по ходу исследования. Взвешивание производилось в шортах и футболках без обуви.
УОО измерялся утром натощак после ночного сна, до измерения участница лежала на кушетке 20-30 минут для акклиматизации к температуре помещения. УОО определялся по концентрациям углекислого газа и кислорода в выдыхаемом воздухе, для чего над головой участницы размещался колпак с вентиляцией и отводом выдыхаемого воздуха. МПК определялось на специализированной беговой дорожке «тредмил» при беге с использованием непрямой калориметрии.
Уровень грелина определялся во взятых образцах крови в начале и конце исследования у 22 дошедших до конца исследования участниц, у 17 из них уровень грелина измерялся также и в середине периода. Чувствительность анализа составила 30 пмоль/л. Все пробы каждой участницы анализировались дважды параллельно.
По завершению исследования, участницы были перегруппированы из 4 групп в 3, и в последующем статистическом анализе сравнивались 3 новые группы взамен 4 первоначальных. Причины перегруппирования в статье не приводятся. Мы полагаем, что организаторы столкнулись с тем, что расчетные методы определения калорийности пищи в надежде на планируемый темп похудения (или удержание) не работают по причинам статистического характера,
http://www.minusfunt.ru/BB/viewtopic.php?f=24&t=137и им пришлось столкнуться с неприятным и непредвиденным обстоятельством – четкая зависимость между запланированным дисбалансом и измеренным отвесом не наблюдалось, соответственно «смазались» зависимости между дисбалансом и уровнем грелина, т.е. сравнение уровня грелина по первоначальным группам оказалось не показательным.
Чтобы спасти исследование, группы были перекомпонованы по конечному результату – из 4 групп стало 3. В неприкосновенности осталась лишь группа 1, контрольная, с удержанием веса и без выполнения упражнений. Из групп 2, 3 и 4, выполнявших физические упражнения, была выделена одна новая группа из участниц, вес которых изменился незначительно, и другая новая группа, в которую вошли участницы, вес которых изменился существенно. Граница между группами была проведена достаточно произвольно, по факту, что в контрольной группе максимальное изменение веса составило ±1,5 кг, и якобы на этом основании все участницы, похудевшие более чем на 1,5 кг, были отнесены в новую группу похудевших участниц.
В приведенном резоне есть определенная доза лукавства – среди участниц, не отнесенных к контрольной группе (каковых оказалось 15), максимальный привес наблюдался у 2 участниц и составил также 1,5 кг. Вряд ли подобное совпадение с точностью до последней значащей цифры случайно. Организаторы оказались не в состоянии путем коррекции калорийности пищи и/или физнагрузки обеспечить стабильность веса в 2 первоначальных группах (что достигается только путем введения отрицательной обратной связи по динамике веса по типу МФ, рассчетные методы не работают), и пришлось отнести в группу участниц со стабильным весом 3 участниц с привесом, 1 участницу с нулевым привесом и 1 участницу с отвесом, не выходящим за пределы симметричной зоны в ±1,5 кг по факту наибольшего привеса.
Итого в новой группе со «стабильным весом» оказалось 5 участниц, а в новой группе «похудевших» 10 участниц. Никаких сведений о том, каким именно образом были перекомпонованы участницы, организаторы не приводят. А они были бы весьма показательны для еще одного подтверждения невозможности планировать удержание или похудение на основе расчетных методов. При этом в описываемом исследовании было сделано все, чтобы этот метод дал наименьшую погрешность – УОО определялся инструментально, а не рассчитывался по формуле, индивидуальные энерготраты повседневной активности определялись акселерометром, а не по усредненному коэффициенту физической активности, энерготраты при выполнении физических упражнений определялись пульсометром Polar по частоте сердечных сокращений.
И, тем не менее, оставшиеся погрешности (УОО меняется в пределах ±10% даже от некогда измеренного индивидуального значения, физактивность по неделям меняется в силу случайных обстоятельств, и результаты некогда проведенного в базовый период мониторинга активности могут оказаться не представительными для периода исследования, где появляется дополнительная физактивность в тренажерном зале, и фактор усталости может способствовать снижению повседневной активности, к этому же ведет дефицит калорий с возможной слабостью) не позволяют похудеть «по расчету».
Впрочем, для наших целей (выявление порога зависимости «грелин - отвес», описанные просчеты организаторов несущественны. Нам достаточно зависимости измеренного уровня грелина от отвеса вне зависимости от отнесения участницы к определенной группе, от того, с каким дисбалансом или его отсутствием она питалась, и занималась она в тренажерном зале или нет.
К выводу о несущественности физнагрузки на уровень грелина пришли сами организаторы, это один из результатов исследования. Статистический анализ результатов показал, что средний уровень грелина существенно вырос в группе похудевших (с 770±296 до 1322±664 пмоль/л), но не изменился значимо в контрольной группе (403±102 до 466±161 пмоль/л) или в группе стабильного веса (744±339 до 646±263 пмоль/л). Зависимость уровня грелина лишь от отвесов при независимости от наличия или отсутствия аэробных упражнений – еще одно подтверждение того обстоятельства, что похудение возможно и без дополнительной физнагрузки, или, как говорится последователями МФ, «физкультура – это еда наоборот».
Подтвердив значимую связь между уровнем грелина и отвесами, исследователи одновременно выявили статистически более слабую и незначимую, с их точки зрения, связь между грелином и калорийностью пищи. Мы об этом писали выше – путем расчета задать дисбаланс невозможно.
В итоге исследователи построили зависимость «грелин – отвес» по 15 участницам. Ввиду больших колебаний уровня грелина от участницы к участнице, организаторы отображают на вертикальной оси графика зависимости «грелин – отвес» не уровень грелина у участницы, а значение изменения уровня, т.е. 0 соответствует стабильному уровню грелина вне зависимости от его абсолютного значения.
Полностью положившись на программу дисперсионного анализа ANOVA, они проводят линию линейной регрессии (зеленая прямая на графике). Трудно возразить – зависимость отрицательная (т.е. при движении по горизонтальной оси вправо уровень падает). Но отчего линейно? Так принято – проводится линия регрессии и подсчитывается коэффициент детерминации, определяющий качество построенной модели. Для проведенной по графику линии линейной регрессии коэффициент детерминации равен 0,37. При значениях коэффициента от 0 до 0,5 модель считается моделью плохого качества. Приемлемое качество характеризуется коэффициентом 0,5-0,8, а при коэффициенте 0,8-1,0 качество совсем уж хорошее.
При всем этом в статье отмечается следующее: «существенные изменения в весе, жировой массе, проценте жира, индексе массы тела и уровне основного обмена уменьшаются на начальной стадии эксперимента, в то время как увеличение уровня грелина наблюдается в конечной». Отсюда прямой вывод, который в явном виде не был сделан, что зависимость «грелин – отвес» нелинейная. Сделаем его сейчас, через 13 лет. Обработка результатов старых экспериментов с новых позиций – очень благодарное дело, и весьма распространенное. Миннесотский эксперимент 1944 года обрабатывается до сих пор, оттого как повторить его шансов никаких.
По принципам МФ устоявшийся УОО при изменении дисбаланса не изменяется вплоть до дисбаланса 400 ккал, а затем, с увеличением дисбаланса, линейно снижается. Модель очень грубая, но работающая. Этот принцип основан на предположении, что организм в ходе эволюции выработал «зону нечувствительности» шириной в 400 ккал, вступление в которую не влияло на физические способности древнего охотника. Если бы это было не так, любой временный сбой в поступлении пищи привел бы к уменьшению шансов эту пищу добыть вследствие ухудшения самочувствия и работоспособности. Впрочем, отчего обязательно древнего охотника – эта зона нечувствительности наверняка существует и у теплокровных животных.
Уровень грелина, как известно, возрастает «к обеду» и снижается после него при насыщении, т.е. грелин, в зависимости от своего уровня, побуждает искать пищу или успокоиться и отдыхать – это в краткосрочной перспективе. В долгосрочной грелин отражает количество жира в организме, возрастая при нехватке и снижаясь при норме и избытке, тем самым поддерживая по принципу отрицательной обратной связи «set point» - вес, поддерживаемый телом самостоятельно, без каких-либо дополнительных усилий.
Если высказать предположение, что грелин должен быть нечувствителен к дисбалансу в той-же зоне, где нечувствителен и УОО (никаких выводов о причинно-следственной связи здесь не делается), зависимость «грелин – дисбаланс», а соответственно и «грелин – отвес за отведенное время» должна представлять собой (при движении по оси изменения веса справа налево) прямую линию, которая с достижением соответствующего дисбалансу 400 ккал отвеса должна смениться в точке перелома прямой линией с отрицательным наклоном.
Параметры этой ломаной линии определяются условием наибольшего соответствия экспериментальным данным. Эта зависимость найдена и нанесена на график (красная ломаная линия). Коэффициент детерминации возрос в сравнении с коэффициентом детерминации для линии линейной регрессии (0,37) и составляет 0,46. Достаточно уже близко к приемлемой модели (0,50). Более точную зависимость искать смысла нет – слишком мало точек и слишком грубы измерения, да и эксперимент не вполне «чист» - идеальные условия могли быть только в казарме. Дело ведь не в подгонке какой-либо кривой под экспериментальные данные, а в нахождении параметров зависимости, выбранной исходя из характера наблюдаемых процессов. А это в данном случае ломаная линия.
Горизонтальная часть зависимости не прошла по уровню 0, а проходит несколько выше при значении 126 пмоль/л, а точке перелома зависимости соответствует отвес -3,95 кг. Встает вопрос, какому времени этот отвес соответствует. Организаторы упоминают 3 месяца, но в начале статьи упоминается, что к исследованию привлекались здоровые женщины с подтвержденным циклом длительностью 25-35 дней. Средняя длина цикла участниц в тексте не упоминается, приходится принять ее равной одному лунному (акушерскому) месяцу в 28 дней. Возможно, длительность периода исследования была разной длины для участниц, и определялась в 3 цикла. Очень разумно, с учетом того, что во второй половине цикла УОО увеличивается в среднем на 150 ккал, и общая для всех участниц длительность исследования в 3 календарных месяца сместит средние значения уровня грелина. Достоверные данные могут быть получены лишь при измерениях в одних и тех-же фазах цикла. 3 лунных месяца равны 12 неделям, тогда недельный отвес для точки перелома составляет 3,95/12 = 0,33 (кг) = 330 г. Неплохое соответствие ожидаемым 400 г, с учетом всех повлиявших на результат погрешностей.
Впрочем, не исключено, что уровень грелина опережает снижение УОО, что опять-таки можно объяснить мудростью эволюции – вначале подаются «звоночки» о приближении к порогу и необходимости добыть еду, и лишь затем по факту неудовлетворения потребности в еде происходит снижение УОО с целью выживания.
Выводы: Уровень грелина в крови и уровень основного обмена при похудении с заранее заданным дефицитом калорий ведут себя одинаково – не реагируют на дефицит в зоне нечувствительности порядка 300-350 ккал (по грелину по данным описываемого исследования), а при дальнейшем возрастании дефицита УОО падает, а уровень грелина повышается, побуждая человека прекратить похудение через рост аппетита.
Можно ли повторить исследование? Безусловно. Но с учетом сделанных ошибок.
1) Отставить в сторону физкультуру или, что лучше, организовать аэробные занятия с постоянным для всех небольшим расходом калорий. Примерно как в Миннесотском эксперименте, где каждый участник был обязан проходить за неделю 35 км организованно за пределами лагеря, плюс повседневная ходьба в пределах лагеря и повседневная бытовая активность.
2) Проводить эксперимент на мужчинах, либо мужчинах/женщинах 50/50, но в этом случае дополнительные помехи внесет цикл, что потребует его учета.